Antecedentes: Cada vez se reconoce más el papel del reflujo gastroesofágico en el daño pulmonar progresivo. Hemos propuesto, basándonos en nuestro trabajo con receptores de trasplantes de pulmón, un nuevo mecanismo inmunitario de lesión pulmonar tras la aspiración del contenido gástrico, durante el cual los niveles más altos de autoantígenos pulmonares (SAgs) normalmente secuestrados colágeno V (Col-V) y tubulina K-alfa-1 (KΑ1T) en pequeñas vesículas extracelulares (EVs) circulantes inducen la producción de autoanticuerpos (SAbs) anti-Col-V y anti-KΑ1T. Por lo tanto, nuestro objetivo era determinar si los niveles de SAbs o SAgs aumentaban en un modelo animal de daño pulmonar inducido por aspiración en un entorno sin trasplante. Métodos: Creamos un modelo murino de aspiración pulmonar repetitiva utilizando ratones C57BL/6J. Los ratones fueron aspirados semanalmente con 1 mL/kg de ácido clorhídrico (n = 9), contenido gástrico humano (n = 9) o fluido combinado (1:1) (n = 9) una, tres o seis veces (n = 3 en cada subgrupo; grupo control, n = 9). Se obtuvieron muestras de sangre periódicamente y todos los animales fueron sacrificados el día 90 para la evaluación patológica. Los SAbs se midieron mediante un ensayo inmunoenzimático; los SAgs y el NF-ampersand-flag-changekappa;B contenidos en las pequeñas VE se evaluaron mediante western blot. Resultados: Los ratones aspirados pesaron significativamente menos que los controles durante todo el estudio y presentaron evidencia histológica de lesión pulmonar en el día 90. En general, los ratones aspirados desarrollaron SAgs más altos que los controles. En general, los ratones aspirados desarrollaron mayores concentraciones de anti-Col-V el día 28 (53,9 ampersand-flag-changeplusmn; 28,7 frente a 29,9 ampersand-flag-changeplusmn; 4,5 ng/mL, p ylt; 0,01), el día 35 (42,6 ampersand-flag-changeplusmn; 19,8 frente a 28,6 ampersand-flag-changeplusmn; 7,2 ng/mL, p = 0,038) y el día 90 (59,7 ampersand-flag-changeplusmn; 27,7 frente a 34,1 ampersand-flag-changeplusmn; 3,2 ng/mL, p = 0,014) que el grupo de control. Las pequeñas VE circulantes aisladas de ratones aspirados el día 90 contenían niveles más altos de Col-V (0,7 ampersand-flag-changeplusmn; 0,56 frente a 0,18 ampersand-flag-changeplusmn; 0,6 m.o.d., p = 0,009) y NF-ampersand-flag-changekappa;B (0,42 ampersand-flag-changeplusmn; 0,27 frente a 0,27 ampersand-flag-changeplusmn; 0,09 m.o.d., p = 0,095) que las de los controles. Conclusiones: Este estudio experimental apoya la teoría de que el reflujo gastroesofágico conduce al desarrollo de daño pulmonar y a un aumento de los marcadores humorales que pueden servir como biomarcadores no invasivos para detectar lesiones pulmonares asintomáticas entre los pacientes con enfermedad por reflujo gastroesofágico.
Background: The role of gastroesophageal reflux in progressive lung damage is increasingly recognized. We have proposed, based on our work with lung transplant recipients, a novel immune mechanism of pulmonary injury after aspiration of gastric contents, during which higher levels of normally sequestered lung self-antigens (SAgs) collagen V (Col-V) and K-alpha-1 tubulin (KΑ1T) in circulating small extracellular vesicles (EVs) induce the production of self-antibodies (SAbs) anti-Col-V and anti-KΑ1T. Thus, we aimed to determine whether levels of SAbs or SAgs increased in an animal model of aspiration-induced lung damage in a nontransplant setting. Methods: We created a murine model of repetitive lung aspiration using C57BL/6J mice. Mice were aspirated weekly with 1 mL/kg of hydrochloric acid (n = 9), human gastric contents (n = 9), or combined (1:1) fluid (n = 9) once, three, or six times (n = 3 in each subgroup; control group, n = 9). Blood samples were periodically obtained, and all animals were sacrificed at day 90 for pathological assessment. SAbs were measured using an enzyme-linked immunosorbent assay; SAgs and NF-ampersand-flag-changekappa;B contained in small EVs were assessed by western blot. Results: Aspirated mice weighed significantly less than controls throughout the study and had histological evidence of pulmonary injury at day 90. Overall, aspirated mice developed higher concentrations of anti-Col-V at day 28 (53.9 ampersand-flag-changeplusmn; 28.7 vs. 29.9 ampersand-flag-changeplusmn; 4.5 ng/mL, p ylt; 0.01), day 35 (42.6 ampersand-flag-changeplusmn; 19.8 vs. 28.6 ampersand-flag-changeplusmn; 7.2 ng/mL, p = 0.038), and day 90 (59.7 ampersand-flag-changeplusmn; 27.7 vs. 34.1 ampersand-flag-changeplusmn; 3.2 ng/mL, p = 0.014) than the control group. Circulating small EVs isolated from aspirated mice on day 90 contained higher levels of Col-V (0.7 ampersand-flag-changeplusmn; 0.56 vs. 0.18 ampersand-flag-changeplusmn; 0.6 m.o.d., p = 0.009) and NF-ampersand-flag-changekappa;B (0.42 ampersand-flag-changeplusmn; 0.27 vs. 0.27 ampersand-flag-changeplusmn; 0.09 m.o.d., p = 0.095) than those from controls. Conclusions: This experimental study supports the theory that gastroesophageal reflux leads to the development of lung damage and an increase of humoral markers that may serve as noninvasive biomarkers to detect asymptomatic lung injury among patients with gastroesophageal reflux disease.
