Identificación de interacciones proteicas de ADAMTS19 en un contexto ovárico Thesis

short description

  • Master's thesis

Thesis author

  • Festiva Mora, María Camila
  • Festiva Mora, María Camila

external tutor

  • Fonseca-Mendoza, Dora Janeth
  • Laissue, Paul

abstract

  • ADAMTS proteins (disintegrins and metalloproteinases with thrombospondin motifs) have been associated with various biological processes including follicular development and ovulation. Some members are considered orphan proteins because their specific substrates have not been described (e.g. ADAMTS19). Specifically ADAMTS19 has recently been suggested as a candidate gene for FOP. In the present study a screening of the potential interaction proteins (partners) of ADAMTS19 was carried out using yeast two hybrid assay. Co-immunoprecipitation was performed on transfected cells and human follicular fluid to verify the direct interaction between ADAMTS19 and COL6A2. RT-PCR assays werw performed to evaluate co-expression of Adamts19 and Col6a2 in mouse ovaries. In addition, the indirect immunofluorescence technique used to evaluate the colocalization of proteins. It was found that ADAMTS19 binds directly to COL6A2 in an ovarian context which correlates with the findings of coexpression and colocalization in human follicular fluid. We propose that ADAMTS19 acts on the microfibers of COL6A2 during follicular growth and expansion of the basal lamina. We found that the p.Thr943Ile ADAMTS19 mutation previously identified in a patient with FOP did not alter the ADAMTS19 / COL6A2 interaction. However, we do not rule out that the mutation contributes to the FOP phenotype. The results of this work, which describe the first direct interaction protein of ADAMTS19, yield new data on the role of metalloproteinases in ovarian biology and fertility.
  • ADAMTS proteins (disintegrins and metalloproteinases with thrombospondin motifs) have been associated with various biological processes including follicular development and ovulation. Some members are considered orphan proteins because their specific substrates have not been described (e.g. ADAMTS19). Specifically ADAMTS19 has recently been suggested as a candidate gene for FOP. In the present study a screening of the potential interaction proteins (partners) of ADAMTS19 was carried out using yeast two hybrid assay. Co-immunoprecipitation was performed on transfected cells and human follicular fluid to verify the direct interaction between ADAMTS19 and COL6A2. RT-PCR assays werw performed to evaluate co-expression of Adamts19 and Col6a2 in mouse ovaries. In addition, the indirect immunofluorescence technique used to evaluate the colocalization of proteins. It was found that ADAMTS19 binds directly to COL6A2 in an ovarian context which correlates with the findings of coexpression and colocalization in human follicular fluid. We propose that ADAMTS19 acts on the microfibers of COL6A2 during follicular growth and expansion of the basal lamina. We found that the p.Thr943Ile ADAMTS19 mutation previously identified in a patient with FOP did not alter the ADAMTS19 / COL6A2 interaction. However, we do not rule out that the mutation contributes to the FOP phenotype. The results of this work, which describe the first direct interaction protein of ADAMTS19, yield new data on the role of metalloproteinases in ovarian biology and fertility.
  • Las proteínas ADAMTS (desintegrinas y metaloproteinasas con motivos trombospondina) han sido asociadas a diversos procesos biológicos entre ellos el desarrollo folicular y la ovulación. Algunos miembros son considerados proteínas huérfanas debido a que no se han descrito sus sustratos específicos (e.g. ADAMTS19). Específicamente ADAMTS19 ha sido sugerido recientemente como un gen candidato de FOP. En el presente trabajo se realizó un tamizaje de las potenciales proteínas de interacción (partners) de ADAMTS19 mediante el sistema de doble híbrido en levaduras. Se realizó coinmunoprecipitación en células transfectadas y en líquido folicular humano para verificar la interacción directa entre ADAMTS19 y COL6A2. Ensayos de RT-PCR efectuados para evaluar la coexpresión de Adamts19 y Col6a2 en ovarios de ratón. Adicionalmente, la técnica de inmunoflurescencia indirecta usó para evaluar la colocalización de las proteínas. Se encontró que ADAMTS19 se une directamente a COL6A2 en un contexto ovárico lo que se correlaciona con los hallazgos de coexpresión y de colocalización en líquido folicular humano. Proponemos que ADAMTS19 actúa sobre las microfibras de COL6A2 durante el crecimiento folicular y la expansión de la lámina basal. Encontramos que la mutación p.Thr943Ile ADAMTS19 identificada previamente en una paciente con FOP no alteraba la interacción ADAMTS19/COL6A2. Sin embargo, no descartamos que la mutación contribuya al fenotipo de FOP. Los resultados de este trabajo, que describen la primera proteína de interacción directa de ADAMTS19, arrojan nuevos datos sobre la función de las metaloproteinasas en la biología del ovario y la fertilidad.
  • Las proteínas ADAMTS (desintegrinas y metaloproteinasas con motivos trombospondina) han sido asociadas a diversos procesos biológicos entre ellos el desarrollo folicular y la ovulación. Algunos miembros son considerados proteínas huérfanas debido a que no se han descrito sus sustratos específicos (e.g. ADAMTS19). Específicamente ADAMTS19 ha sido sugerido recientemente como un gen candidato de FOP. En el presente trabajo se realizó un tamizaje de las potenciales proteínas de interacción (partners) de ADAMTS19 mediante el sistema de doble híbrido en levaduras. Se realizó coinmunoprecipitación en células transfectadas y en líquido folicular humano para verificar la interacción directa entre ADAMTS19 y COL6A2. Ensayos de RT-PCR efectuados para evaluar la coexpresión de Adamts19 y Col6a2 en ovarios de ratón. Adicionalmente, la técnica de inmunoflurescencia indirecta usó para evaluar la colocalización de las proteínas. Se encontró que ADAMTS19 se une directamente a COL6A2 en un contexto ovárico lo que se correlaciona con los hallazgos de coexpresión y de colocalización en líquido folicular humano. Proponemos que ADAMTS19 actúa sobre las microfibras de COL6A2 durante el crecimiento folicular y la expansión de la lámina basal. Encontramos que la mutación p.Thr943Ile ADAMTS19 identificada previamente en una paciente con FOP no alteraba la interacción ADAMTS19/COL6A2. Sin embargo, no descartamos que la mutación contribuya al fenotipo de FOP. Los resultados de este trabajo, que describen la primera proteína de interacción directa de ADAMTS19, arrojan nuevos datos sobre la función de las metaloproteinasas en la biología del ovario y la fertilidad.

publication date

  • 2017/03/03

keywords

  • ADAMTS19
  • COL6A2
  • Ovary
  • Premature ovarian failure
  • Proteic interaction

Document Id

  • 0d530661-5bb4-4a0a-a586-86062b3e7290