Evaluation of a molecular and immunological test for the diagnosis of histoplasmosis (Protocol 4250)
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Histoplasmosis, a systemic fungal disease caused by Histoplasma capsulatum, is the most common endemic fungal disease in AIDS patients in the United States. Ninety-five percent of patients with AIDS and histoplasmosis develop disseminated disease, and 90% of these have CD4 counts below 200/µL. Histoplasmosis has a global distribution, although incidence data are often not available, the disease is found in Central and South America, as well as in Africa and South-East Asia. In many parts of Latin America, including Colombia, histoplasmosis is endemic and presents a significant problem in AIDS patients. The incidence of histoplasmosis in Latin America is based on large case series studies reported from different centers with mortalities as high as 48%. Justification of the study. New antiretroviral therapy treatments have improved immune status in HIV-infected patients in developed countries. However, in patients from Colombia and other developing countries, there is often limited access to these new anti-HIV drugs. As a result, the incidence of disseminated histoplasmosis continues to increase in developing countries, where the AIDS epidemic is increasing and histoplasmosis is endemic. Therefore, the implementation of new diagnostic tests would have a major impact on public health in large populations of individuals in developing countries. Antibody detection methods offer a quick alternative to microbiological techniques. However, antibody detection is still based on complement fixation (CF) and immunodiffusion (ID) techniques, most of which use non-standard reagents. In addition, the CF test lacks specificity and the ID test is often negative in the acute phase of the disease because of the long time needed to produce detectable amounts of antibodies. In addition, antibody testing may be less useful in immunocompromised patient populations, where antibody production is often limited. Delaying appropriate treatment results in increased mortality and morbidity in these patient populations. Objectives: To evaluate new diagnostic methodology in molecular biology and immunology for the diagnosis of histoplasmosis. Specific 1) To determine whether the presence of antigens for H. capsulatum in HIV-infected patients is a good indicator of disseminated histoplasmosis. 2) Detection of H. capsulatum DNA in clinical samples using real-time PCR methodology. 3) To determine if the results of the tests carried out through molecular biology correlate with the results of the treatment of the disease.
La histoplasmosis, es una enfermedad fúngica sistémica provocada por Histoplasma capsulatum, es la más común de las micosis endémicas en pacientes con SIDA en los Estados Unidos. El 95% de los de pacientes con SIDA e histoplasmosis desarrollan enfermedad diseminada y el 90% de estos tienen recuentos de CD4 menores de 200/µl. La histoplasmosis tiene una distribución global, aunque frecuentemente los datos de su incidencia no están disponibles, la enfermedad se encuentra en Centro y Sur América, así como también en África y al sur este de Asia. En muchas partes de América Latina, incluyendo Colombia, la histoplasmosis es endémica y presenta un problema importante en pacientes con SIDA. La incidencia de histoplasmosis en América Latina, se basa en estudios de series grandes de casos reportados desde distintos centros con mortalidades tan altas hasta 48%. Justificación del estudio. Los nuevos tratamientos de terapia antirretroviral han mejorado la condición inmune en pacientes infectados por el VIH en países desarrollados. Sin embargo, en pacientes provenientes de Colombia y otros países en desarrollo, frecuentemente se tiene acceso limitado a estas nuevas drogas anti VIH. Como resultado, la incidencia de histoplasmosis diseminada continúa aumentando en países en desarrollo, en los cuales la epidemia de SIDA esta aumentando y la histoplasmosis es endémica. Por lo tanto, la implementación de nuevas pruebas diagnósticas tendría un gran impacto en la salud pública en grandes poblaciones de individuos en países en desarrollo. Los métodos de detección de anticuerpos ofrecen una alternativa rápida a las técnicas microbiológicas. Sin embargo, la detección de anticuerpos todavía se basa en técnicas de fijación de complemento (CF) y la prueba de inmunodifusión (ID) que en su mayor parte, utilizan reactivos no estandarizados. Además, la prueba de CF carece de especificidad y la prueba de ID es frecuentemente negativa en la fase aguda de la enfermedad, a causa del tiempo prolongado que se necesita para producir cantidades perceptibles de anticuerpos. Además, las pruebas para la detección de anticuerpos pueden ser menos útiles en poblaciones de pacientes inmunocomprometidos, en donde la producción de anticuerpos suele ser limitada. El retraso del tratamiento apropiado resulta en un aumento de la mortalidad y morbilidad en estas poblaciones de pacientes. Objetivos: Evaluar nuevas metodología diagnosticas en biología molecular e inmunología para el diagnóstico de histoplasmosis. Específicos 1) Determinar sí la presencia de antígenos para H. capsulatum, en pacientes infectados por el VIH como un buen indicador de histoplasmosis diseminada. 2) Detección de DNA de H. capsulatum, en muestras clínicas usando una metodología de PCR en tiempo real. 3) Determinar sí los resultados de las pruebas efectuadas a través de biología molecular correlacionan con los resultado del tratamiento de la enfermedad.
