La familia Reduviidae (Hemiptera: Heteroptera) se encuentra entre las familias más diversas de los verdaderos insectos. La evolución y las relaciones filogenéticas de las tribus Rhodniini y Triatomini (Triatominae) están bien estudiadas debido a su relevancia epidemiológica como vectores de Trypanosoma cruzi, el parásito que causa la enfermedad de Chagas. Rhodniini está compuesto por los géneros Rhodnius y Psammolestes, donde queda por estudiar la diversidad genética del segundo en comparación con Rhodnius, principal vector de T. cruzi. Por lo tanto, reunimos 92 muestras en total, 38 de Psammolestes arthuri en Colombia, 24 de Psammolestes tertius y 30 de coreodas de Psammolestes en Brasil. Usamos cinco nuevos loci nucleares: tRNA guanina (37) -N (1) metil transferasa (TRNA), proteína inducible por hormona juvenil putativa (PJH), proteína de ensamblaje de proteína de azufre de hierro citosólico probable Ciao 1 (CISP), lipoil sintasa, mitocondrial ( LSM) y proteína no caracterizada para la adhesión celular (UPCA), junto con dos loci previamente informados: 28S y CYTB, para representar las relaciones filogenéticas y los patrones evolutivos del género Psammolestes. Cuatro de las siete topologías de genes no eran consistentes con la topología concatenada, mientras que las otras tres eran concordantes, pero el patrón general es claro: Psammolestes es un grupo monofilético, corroborando hipótesis previamente sugeridas para el género. El análisis de agrupamiento junto con las estadísticas resumidas de genética de poblaciones dio como resultado la delimitación de tres poblaciones diferentes. Estos tres clusters corresponden a cada una de las especies de Psammolestes conocidas a priori -definidas por morfología, ecología y métodos citogenéticos- lo que sugiere que las poblaciones de cada una de las especies tienen una estructura genética bien sustentada. En general, nuestros resultados corroboraron la existencia de las tres especies de Psammolestes descritas anteriormente, 4 mostrando que probablemente divergieron en alopatría, bajo la influencia del escudo de Guyana y la cuenca del Amazonas como barreras para la dispersión.